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    帶你認識真正的miRNA定量檢測

  3. 發布日期:2014-09-01      瀏覽次數:2273
    •    miRNA定量檢測是一類有大約22個核苷酸組成的非編碼小分子RNA,其廣泛存在于真核生物中。miRNA定量檢測在個體發育的不同時期及不同組織中有不同的表達模式,都表明了其在發育和分化中起有重大的調控作用。迄今為此,對miRNA定量檢測的檢測方法主要有Northern Blot 等基于分子雜交的方法,這些方法敏感度低、耗時長、RNA的用量較大。miRNA定量檢測 qPCR Detection Kit采用了上*的核酸檢測標準技術――Real-Time PCR技術來對miRNA定量檢測進行檢測,其具有快速、特異性強、靈敏度高等優點。
        miRNA定量檢測雖小,卻在許多生物過程中扮演了重要角色,而它們也有望成為疾病診斷的標志物以及治療的靶點。然而,由于成熟miRNA定量檢測很小, miRNA定量檢測家族成員之間的同源性高,而且miRNA定量檢測在體液中的豐度較低,故miRNA定量檢測的檢測和定量頗具挑戰性。近年來,一些miRNA定量檢測表達譜分析技術被開發出來,并成功應用于miRNA定量檢測表達的定量。
        miRNA定量檢測的檢測分為以下三大步驟
        1、  miRNA定量檢測的抽提
        2、  miRNA定量檢測的poly A化及逆轉錄
        3、  miRNA定量檢測的熒光定量檢測
        由美國小分子RNA研究公司推出來的常規化miRNA定量檢測逆轉錄試劑盒。它是通過Poly A Polymerase 對miRNA定量檢測 3'端進行加“Poly A”處理,同時利用M-MLV RTase 及*的Oligo dT Adaptor 對Poly A化的RNA 進行反轉錄。該試劑盒是目前市場上應用zui普遍、常規的miRNA定量檢測逆轉錄試劑盒,與任何一種品牌的qPCR Mix搭配,都能定量的檢測樣本中miRNA定量檢測的含量,是miRNA定量檢測研究的利器,是做miRNA定量檢測熒光定量檢測的必須試劑。該試劑盒是采用PCR技術結合SYBR Green 嵌合熒光法進行實時熒光定量PCR 的試劑,產品中含有已優化濃度的Hot-start DNA聚合酶、Buffer、dNTP和SYBR Green ,使用時只需加入模板和引物即可進行Real-Time PCR實驗,操作方便、快捷,并且重復性好。本產品適合現有市場上所有的熒光定量PCR儀,產品附帶的ROX Dye, 可進行反應校正。
        miRNA定量檢測產品特點:基于SYBR Green 法檢測的定量PCR反應Mix,采用特殊修飾的Taq酶進行熱啟動,miRNA定量檢測能有效避免非特異性擴增及引物二聚體產生,優化的反應體系,能的進行低拷貝數基因擴增,擴增效率高,能在寬廣的范圍內進行定量,miRNA定量檢測采用2×qPCR Mix包裝,使用方便快捷。
        miRNA定量檢測利用每個平臺分析16個(必選)和4個(可選)標準化的陽性和陰性對照樣品,以評估各種性能,包括特異性、靈敏度、準確性和重復性。他們將每個參數轉化成z-分數,以實現平臺的直接比較。
        分 析表明,miRNA定量檢測基于相同技術的平臺可能有著非常不同的性能。這一點在qPCR平臺的重復性和特異性上表現得zui為明顯。相比之下,靈敏度是技術相關的,qPCR平 臺有著整體上更好的分數。這種出色的靈敏度往往伴隨著高的準確性,帶來可靠的定量測定。芯片平臺的靈敏度較低,即使是起始RNA不受限制可以根據miRNA定量檢測的成熟序列,快速定制相應的qPCR assay采用高靈敏的MGB探針和莖環特異性逆轉錄引物,具有以下特性:
        1) 特異性好:*的miRNA定量檢測引物設計技術及其優化的反應體系避免了轉染質粒的污染。
        2) 分辨率高:能分辨單堿基差異的miRNA定量檢測。
        3) 靈敏度高:可在低至pg級的總RNA中檢測到特異表達的miRNA定量檢測原理由于miRNA定量檢測s在眾多程序的調控,諸如生物發育、細胞增殖和凋亡以及近來被證明與腫瘤發生相關等領域發揮作用,因此miRNA定量檢測s的鑒定和定性研究成為迅速發展的一大研究領域。zui典型的鑒定miRNA定量檢測s的方法是檢測miRNA定量檢測的表達譜,如果發現某一種miRNA定量檢測在某種特定組織或細胞中特異性表達的話,此miRNA定量檢測將被假定在此特定組織或細胞中發揮某種調控作用。同樣,如果某一種miRNA定量檢測在生物特殊發育階段表達的話,則它有可能是調控發育進程一個主要分子。
       
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