1. <dl id="mkbvf"></dl><em id="mkbvf"></em>

  2. 相關(guān)文章

    Western 免疫印跡

    簡(jiǎn)要描述:Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)已知表達(dá)蛋白,可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測(cè),對(duì)新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過(guò)融合部分的抗體檢測(cè)。

    • 產(chǎn)品型號(hào):
    • 廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
    • 更新時(shí)間:2024-05-13
    • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:4258

    Western免疫印跡

        Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過(guò)PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類(lèi)型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過(guò)底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

    Western Blot操作步驟
    (一)蛋白質(zhì)樣品獲得:細(xì)菌誘導(dǎo)表達(dá)后,可通過(guò)電泳上樣緩沖液直接裂解細(xì)胞,真核細(xì)胞加勻漿緩沖液,機(jī)械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃,13,000g離心15min。取上清液作為樣品。
    (二)電泳:制備電泳凝膠,進(jìn)行SDS-PAGE。
    (三)轉(zhuǎn)移:(半干式轉(zhuǎn)移)
    1、電泳結(jié)束后將膠條割至合適大小,用轉(zhuǎn)膜緩沖液平衡,5min×3次。
    2、膜處理:預(yù)先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜,浸入轉(zhuǎn)膜緩沖液中10min。
    3、轉(zhuǎn)膜:轉(zhuǎn)膜裝置從下至上依次按陽(yáng)極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好,濾紙、凝膠、NC膜精確對(duì)齊,每一步去除氣泡,上壓500g重物,將碳板上多余的液體吸干。接通電源,恒流1mA/cm2,轉(zhuǎn)移1.5hr。轉(zhuǎn)移結(jié)束后,斷開(kāi)電源將膜取出,割取待測(cè)膜條做免疫印跡。將有蛋白標(biāo)準(zhǔn)的條帶染色,放入膜染色液中50s后,在50%甲醇中多次脫色,至背景清晰,然后用雙蒸水洗,風(fēng)干夾于兩層濾紙中保存,留與顯色結(jié)果作對(duì)比。
    (四)免疫反應(yīng):
    1、用0.01M PBS洗膜,5min ×3次。
    2、加入包被液,平穩(wěn)搖動(dòng),室溫2hr。
    3、棄包被液,用0.01M PBS洗膜,5min×3次。
    4、加入一抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋?zhuān)后w必須覆蓋膜的全部),4℃ 放置12hr以上。陰性對(duì)照,以1%BSA取代一抗,其余步驟與實(shí)驗(yàn)組相同。
    5、棄一抗和1%BSA,用0.01M PBS分別洗膜,5min×4次。
    6、加入辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗(按合適稀釋比例用0.01M  PBS稀釋?zhuān)椒€(wěn)搖動(dòng),室溫2hr。
    7、棄二抗,用0.01M PBS洗膜,5min×4次。
    8、加入顯色液,避光顯色至出現(xiàn)條帶時(shí)放入雙蒸水中終止反應(yīng)。

    Western Blot注意事項(xiàng)
    1、一抗、二抗的稀釋度、作用時(shí)間和溫度對(duì)不同的蛋白要經(jīng)過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定*條件。
    2、顯色液必須新鮮配置使用,zui后加入H2O2。
    3、DAB有致癌的潛在可能,操作時(shí)要小心仔細(xì)。

     

     

     

    留言框

    • 產(chǎn)品:

    • 您的單位:

    • 您的姓名:

    • 聯(lián)系電話(huà):

    • 常用郵箱:

    • 省份:

    • 詳細(xì)地址:

    • 補(bǔ)充說(shuō)明:

    • 驗(yàn)證碼:

      請(qǐng)輸入計(jì)算結(jié)果(填寫(xiě)阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7
    久久中文字幕人妻熟av女| 久久综合九色综合网站| 久久精品国产秦先生| 欧美噜噜久久久XXX| 天堂无码久久综合东京热| 久久精品亚洲一区二区三区浴池| 久久久无码人妻精品无码| 久久精品中文闷骚内射| 91精品国产91久久久久久蜜臀| 亚洲色欲久久久久综合网| 日韩精品久久久久久免费| 品成人欧美大片久久国产欧美...| 人妻丰满?V无码久久不卡| 久久亚洲AV成人无码国产| 精品无码久久久久久久动漫| 亚洲综合精品香蕉久久网| 亚洲国产成人久久综合碰碰动漫3d | 欧美国产成人久久精品| 久久免费视频网站| 无码人妻久久一区二区三区免费丨| 久久综合综合久久狠狠狠97色88| 久久人人爽人爽人人爽av| 久久精品中文字幕久久| 亚洲va国产va天堂va久久| 老司机午夜网站国内精品久久久久久久久 | 久久国产高潮流白浆免费观看| 久久久久亚洲AV成人网人人软件 | 一本色道久久综合| 久久天天躁狠狠躁夜夜不卡 | 国产精品久久久久蜜芽| 久久久久久极精品久久久| 久久综合综合久久狠狠狠97色88| 丁香狠狠色婷婷久久综合| 精品熟女少妇av免费久久| 久久精品国产免费观看 | 伊人久久精品线影院| 国产成人精品久久免费动漫| 久久Av无码精品人妻系列| 狠狠色噜噜色狠狠狠综合久久| 久久久国产视频| 久久WWW免费人成一看片|