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    DNA CpG甲基化檢測服務

    簡要描述:DNA甲基化是表觀遺傳修飾的主要方式,它不改變DNA的一級結構,卻在細胞的發育、基因的表達、及基因組的穩定性中起著重要的作用。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現象,而啟動子CpG島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。因此,基因啟動子甲基化檢測在臨床診斷(如甲基化檢測與低劑量CT相結合)、藥物敏感性檢測等方面具有很高的應用價值。

    • 產品型號:
    • 廠商性質:生產廠家
    • 更新時間:2024-05-13
    • 訪  問  量:5261

    DNA CpG甲基化檢測

    甲基化特異性的PCR(methylation-specific PCR)應用

        DNA甲基化在人的正常發育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病(如發育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經心理失調等)過程中發揮重要作用,已經成為表觀遺傳學和表觀基因組學的重要研究內容。

        DNA甲基化是表觀遺傳修飾的主要方式,它不改變DNA的一級結構,卻在細胞的發育、基因的表達、及基因組的穩定性中起著重要的作用。CpG島的高甲基化是腫瘤中存在的普遍現象,而啟動子CpG島的高甲基化是除突變和缺失外腫瘤中抑癌基因失活的第三種機制。

        因此,基因啟動子甲基化檢測在臨床診斷(如甲基化檢測與低劑量CT相結合)、藥物敏感性檢測等方面具有很高的應用價值。

    甲基化特異性PCR法原理(Methylation-specific PCR,MSP) 

        MSP法的原理是基于DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是*存在的化學性修飾堿基。CG二核苷酸是zui主要的甲基化位點,它在基因組中呈不均勻分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區域,在哺乳動物中mC約占C總量的2-7%。一般說來,DNA的甲基化會抑制基因的表達;針對特定區域設計引物,再進行PCR擴增,甲基化的位點可以被當作一個C/T的SNP來處理;可利用直接測序法來判斷是否CpG位點發生甲基化。具有方便快捷,靈敏度高的優點,是目前較為常用的甲基化檢測方法。

     MSP實驗流程:

    1.基因組DNA制備,樣本類型有:組織,血液,細胞,毛發,唾液等。

    2.經亞硫酸氫鈉處理后,未甲基化的胞嘧啶發生脫氨基變為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則不變。

    3.DNA修飾后,進行純化及回收。 

    4.修飾后的DNA進行PCR擴增。

    5.電泳或直接測序檢測

    6.實驗報告(包括MSP基因組DNA,PCR產物及電泳照片)

    樣品要求
    1、基因組DNA(≥1µg),純度(OD:1.9-2.0)
    2、若提供的材料為新鮮組織、血液、細胞等生物材料,請提供足夠提取1µg以上基因組DNA的材料量。
    3.樣本運輸途中,需要加冰袋,或干冰。

     

     

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